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高效凝胶色谱法测定猫爪草多糖组分的分子量

发布时间:

中药药效提高与中药饮片 质 量 控 制 交流 研 讨会

高效 凝胶 色谱法测 定猫 爪草 多糖组 分 的 分 子量
王 爱武
摘 要 目的
流动相为

,

袁 久 荣 刘 军杰 宿 莹 莹
,

,

,



山 东省 立 医 院天 然药物 研 究 中心 济 南

山 东中医 药 大 学


,

济南



采 用 高效凝 胶色 谱 法测定 猫 爪 草中所含多糖 组 分 的分子 量
溶液
,

方法


色 谱柱

,

流速
,

,

柱温




示 差 折 光检 测 器

结果


,

析 四 个 纯 化 部位 的 高效凝胶色谱 图谱 快速
,

多糖 组 分* 均 分子量 分布 部 位 在 为

以下



结论

该法 简便

可 用 于 测 定猫 爪 草 多糖 分 子 量 分 布 范 围

关键 词

高 效 凝胶色谱 法

猫爪 草

多糖

分 子 量 分布

*



,

,

,





,


血城



, ’







,


,

,

如川
血间





,








,


,

中药 猫 爪 草 为 毛 蓖 科植物 小 毛 食 用 于 治 疗 凛病 淋 巴 结核未溃 肺 结核
、 、

的干 燥 块 根


,

具散结





消肿 之 功效
,


,



淋 巴 结炎




咽喉炎



疖病



肿 瘤 等疾 病 ,
,


药 理 实验 表 明

猫爪

草 水提 取 物 具 有 明显 的体 外抗 肿 瘤 作 用 瘤



多糖 为 一 类结构 复杂 的 高分 子 聚合 物
本 实验 采 用



具有 提 高 免疫 力 抗 肿

,

抗病毒 等 多方 面 的 生 物 活 性
含糖

,

,

* 年来 己 受 到人 们 的 极 大 关注 降


曾有报 道 猫 爪 草中 多糖 占较大 的 比

,

,

,

,

是 主 要 有 效成分 之 一








柱层 析


,



不 同浓 度 的

溶 液梯 度洗 脱


,

对 猫 爪 草 多糖 进 行 了纯 化
,

采用 高效 凝 胶色谱 法



色谱 柱

示 差 折光 检 测 器

测 定猫 爪 草 中所含 多糖 组 分 的 分 子量
以下
,

结 果 分 得 四个 多糖 组 分 纯 化部

位 * 均分 子 量 分布 部 位 多在 为 的 参 考价 值 仪器
、 。

这对 于深 入 研 究猫 爪 草多糖 的功 能及 进 一 步 开 发利 用 具 有 一 定

材料 与试剂


仪器

凝 胶色 谱仪 美 国
示差 折光 检 测 器 旧 本 上 海 光 谱 仪 器 有 限公 司

公司



,




色谱 柱



专用 软 件
电子 天 *
北 京旭 成 超 滤设 备 厂
,

型 紫 外 可 见 分光 光度 计

瑞士 超 纯 水仪

透 析 袋 磁 力搅

拌器 江 苏 金 坛 医 疗 仪 器 厂 中 空 纤维超 滤装 置 博 医康技 术公 司 材料 与 试剂

型号



冷 冻干燥 机


北京




离心 沉 淀 机

上 海 医 用 分析仪 器 厂

标准 葡 聚 糖

系列 为

产品







中药药效 提 高与中药饮 片质 量 控 * 流研 讨 会




,










批号
,




,



产品


,



,

超纯水
,

葱酮



硫酸
,



氯化 钠

硫 酸钠 和 其 它相 关 试 剂均 为分 析纯




验 用 猫爪 草 蓖 科小 毛 食

购 自济 南 市 建联 药 店

产 地 为河 南

,

经 山 东 中 医 药大学 中药 鉴 定 教研 室 石 俊英 教授 鉴 定 为 毛

的干 燥块根

为 当年 人 工 栽 培 品 种

方法与 结 果
色 谱 条件 凝 胶色 谱 为 进 样量 对 照 品 溶液 的制 备 称取 供 分子 量 测 定用 标准葡 聚 糖 的 系 列对 照 品 对 照 品溶 液




,

流动 相 为


溶液

,

流速

,

压 力为

柱温



灵敏度

,



量瓶中

,

分 别 加超 纯 水 稀释 至 刻度

,

作为

供 试 品 溶液 的 制 备 总 多糖 的制 备【 〕 称 取 猫 爪 草
,

,

粗粉碎 过
, ,

目筛 加 蒸馏 水 浸 提
,

,

次 加水 倍 数 分别为
,

,



倍量
藏过夜 多糖

,

,

时间分别 为
反 复醇沉

,

浸 提温度 为
沉 淀用 乙 醚




浸提 液 过 滤


浓 缩至
,

,

加 入 乙 醇 使 醇沉浓 度
法脱 蛋 白
, ,



,



,

丙 酮洗净



再 用 适量 水溶 解

采用

得到猫爪 草 总 使其 充 分溶 解



总 多糖 的 柱 层 析 纯 化分 离
置 于透 析 袋 内
,

称取
,

所得 总 多糖


,

加去 离子 水约
过滤
。 。

磁 力 搅拌 下 透 析




离心 巧 而
,

,

滤液于

℃减 压 浓 缩 至 约





,

通过
,



适量

以葱酮 一 硫酸法

’ 丁。



溶液进 行 梯度洗 脱 川逐 管进行 检测 合 并相 同峰位 将 多糖分 段 然后 再 通 过
, ,

柱层 析

依 次用



取 各接 收管 的溶 液


凝胶柱

,

洗脱
,

,

逐 管进 行 检 测

结果得 到 了 个 部 位 多糖 工








工工 工
,





供 试 品 溶液 的制 备 分 别称 取 多糖 样 品 工
释 至 刻度







工 工



各约




量瓶中

,

加 超 纯 水溶 解并 稀

晰 微 孔滤膜滤过

,

滤液作 为供 试 品 溶液
,

标准 曲线制备 按


色 谱条件
,

,

精密 吸 取 系列对 照 品溶 液
为纵 坐 标
,

分别进 样

,

注 入 高效液 相 凝 胶色谱仪



记 录洗脱
,

峰 的保 留时间 回归方 程

以相 对 分 子量 的对 数
二 二



保 留时间
,

为横 坐 标

,

进 行 线性回归分 析
,





以专用

软件 绘 制 标 准 曲线

结果 图







标准 曲线 次
,

精 密 度 试验
取 对 照 品溶 液


及 供 试 品 溶 液 工 分别进 样
工的 分 别 为
,


根据

曲线

,

计 算重 均 分子 量



对照 品的



,

供试 品 溶 液 色谱 条 件
可见
,

多 糖 组 分分 子 量 的 测 定 按 根据
果表






,

精密 吸 取 各供 试 品溶 液
,



,

注 入 高效 液 相凝胶 色 谱仪
,

,

色谱分 析结 果 见 图
再 求 出相对 分子量
,



标准 曲线及 供 试 品 的 保 留 时 间
由表

采用

软 件 计 算 样 品 各 组 分 的对 数 值



四 个部位 纯 化 多糖均 为 分 子 量 多 为低 于

的低 分 子 量 糖



中药药效提 高与 中药饮 片质量控 *涣餮 讨会



样 品 分 子 量 测 定结 果
重均


样品


峰位

峰高
之 〕 八 认 } 叹 触

峰面积
分子量 分 子量


数均
分子 量

峰位 分子量

分子量

巧 汤 住 毅 水 补 令 不 截 小 引 大 肛 公 沟



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峰位 分 子量 作 为相对 分 子量 测 定结果 的 参 考数 值







靓 洲 山 川



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〔 幼




‘ 月 李

鱿



图 小 结和 讨 论

多糖

图谱

提 取 条件 试验 中猫 爪 草 总 多糖 的提 取 方 法

,

是 在前 期研 究 工 作 的基础 上


,

同 时 参考 相 关 文 献

,

经过 反

复验 证 选 用 的

,

得 到 的 总 多糖 为浅 灰 白色

,

得 率较高

纯度较 好



中药药 效提 高 与 中药饮 片质 量控 *涣 研讨 会

柱 层 析 分 离条 件

柱 层 析 分 离 多糖 时

,

吸 附 剂 的型 号选 择 是 尤 为 重 要
,

,

其 次 是 洗 脱 剂 的选 择









,

度梯 度 及 洗 脱 流 速
较好




实验 中经过优化选择 证 实







分离 此 类 多糖效果
为优


同 时洗 脱速 度根据 实 际 情 况 进行 了调 节
一 一



凝胶 柱 以 溶液
,

溶液




洗脱流 速

柱层 析用 多 糖分子 量 检 测 结 果 有 学 者
纯化


洗脱速 度 为




】 曾报 道 测 得 猫 爪 草多糖 的 分 子 量 为
,



,

本 实验 样 品所 得 多糖经
的 多糖 组 成
, ,

分为


个 部位

,



检 测 图 谱 分析

主要是 由


个分 子 量 分 布 范 围低 于
,

这 可 能 主 要与所 用药 材产地 及 采 收季 节 不 同有关

同 时 由于 低 分 子 多糖 在 实 际 生 活 中 己 具 有 重 要 的 使用 价

,



, ” 的 〔 ”】

而 多糖 的 结构与 功 能 关 系 至 今 仍 是 多 糖研 究 的 薄 弱 环 节


实验 所 得 多糖 为低 聚 糖 对于深

入 研 究 猫爪 草多糖 的结 构 及 进 一 步 开 发利 用 有 一 定 的参 考 价 值

参 考文 献
」中华人 民共和 国卫 生 部 药 典委 员 会编 中华 人 民共 和 国 药典 仁

一部
,

广 东 广 东 科技 出版 社

,

金 山丛 中药 猫 爪 草 的研 究 概 况 中 药 材
王 爱武 王 梅 袁 久荣
, , ,

,

,




, ,

等 猫 爪 草提 取 物体外 抗肿瘤 作用 的研 究 天 然 产 物研 究 与 开 发
,



」王 爱 武 袁 久 荣 吴 丽 敏
, ,

等 不 同 产 地猫 爪 草 中多糖 含 量 的 比 较 中 国 中 医 药 信 息杂 志

,

,



〔 王 爱武

,

袁 久荣
,

,

吴 丽 敏 猫爪 草 不 同提 取 物 对 移 植性 肝 癌

小 鼠的 抗 肿瘤 作 用 的 实 验研 究
,

国新 药 杂 志
「 韩果 萍 〔

丁 保金
,


,


,

,

段 玉 峰 我 国天 然 活 性 多糖 药 理 研 究进 展 中 药 材 金丽 琴
,



,

吕建 新 多糖 的 生 物 活 性研究 进 展 中 国 药学杂 志
,

,

,



「 辛娟 仁

王 远亮
,
,

郭莉霞
,

等 多糖 的生 物 活 性 及 其 应 用 生 物 医 学 工 程 研 究
,

,

,



陈伟

一 林新华 葱酮 硫 酸 法测 定 库 拉 索芦 荟 多糖含 量 中 国医 院 药学杂 志

,

,



曾群力 霍亚 楠 毛 俊 浩
,

等 肉 从蓉 多糖 的分 离




纯化 和 鉴 定 中草 药

,

,



「 〕陈 彦 戴玲 王 业 寿
,

猫 爪 草 多糖

的 提 取纯 化 及 其 生 物 活 性 中国药学 杂 志
,

,

,



「 〕王 东辉 功 能性 低 聚 糖 生 理 特性 及 开 发利 用 山 西 食 品 工 业 「 〕高小荣
,

,



刘培 勋 多糖 构 效关系 研 究 进 展 中草 药

,

,



清 热 祛湿 益气法对

诱导

急 性肝损 伤 超 微病 理研 究
黄霞 刘 超 孙 为
河 南省 中医 药 研 究 院 河 南 郑 州
‘ ‘

刘 惠霞
河南 郑州


郑 州 大 学 第 二 附属 医 院

摘 要 目的 观 察清 热 祛湿 益 气 法
雄 性 小 鼠随机 分 为空 白组


对 低
、 、

诱 导 肝 损 伤 小 鼠肝 组 织超 微 结 构 的影响 方法
,

模 型组



中 高剂 量 组

连续 灌 胃



,

空 白组 注 射等 量 无 菌

溶液

,




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